慢病毒載體下游純化工藝（一）

慢病毒載體 (LV) 可以穩定地整合到分裂細胞和非分裂細胞的基因組中，因此在基因和細胞治療的應用越來越廣泛。在過去的幾十年里，慢病毒載體的生產和純化工藝發展迅速，行業對慢病毒載體滴度量和純度都有更高的要求，刺激著行業開發新材料或采用優化慢病毒載體的策略，來滿足市場對慢病毒載體經濟效益的要求。即使慢病毒載體的培養方式正在向懸浮培養遷移，但是目前大多數大規模培養仍然是貼壁細胞培養。其純化策略主要層析純化技術和膜過濾技術。

目前行業中也有一些新開發的解決方案來改進或替代目前的生產方案，以滿足慢病毒載體日益增長的臨床應用需求。

慢病毒載體是逆轉錄病毒科的包膜病毒成員，由于它在分裂和非分裂細胞都具有將外來基因穩定地整合到宿主細胞基因組中并穩定表達的特性，因此可以被生物制藥作為載體利用。此外，它們的整合模式似乎比γ-逆轉錄病毒載體風險小，因此它們被功能基因組學、細胞工程研究，以及重組蛋白生產和臨床基因治療等領域廣泛應用。

慢病毒下游工藝純化難點：目前的生產技術所獲得的病毒滴度大概在 1.0E6-1.0E8TU/mL這個范圍內，其低滴度主要是與生產系統、慢病毒假型特性、收獲條件，甚至是滴定技術有關。雜質會隨著生產系統的不同而隨之變化的。例如，貼壁細胞培養慢病毒就會有血清雜質，質粒DNA雜質會出現在瞬時轉染過程當中。因此在下游純化階段，需要根據不同的應用需求調整慢病毒載體的濃度和純度。在臨床上，病毒載體的濃度和純度需要考慮到藥物安全性、需要降低其致瘤潛能和細胞毒性。對于體內臨床應用，需要保證每個患者劑量在1.0E11- 1.0E12TU/mL，同時盡量減少產生免疫反應。 在下游純化工藝還需要考慮到慢病毒顆粒本身的不穩定性。它會受溫度、離子強度、pH和剪應力等環境因素的影響。

本文節選、翻譯自以下參考文獻，由于水平有限，詳細內容，請參考原文。本文旨在知識、信息分享，如有任何問題，請私信聯系。