細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)分享

　　細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)又稱單細(xì)胞分離培養(yǎng)技術(shù)，即在體外將一個(gè)細(xì)胞從細(xì)胞群中分離出來(lái)，使其能夠復(fù)制成一個(gè)新的細(xì)胞群培養(yǎng)體系。由單個(gè)細(xì)胞形成的細(xì)胞群稱為克隆，純化后的細(xì)胞群稱為細(xì)胞系，即細(xì)胞培養(yǎng)。
 

　　各細(xì)胞的遺傳和生物學(xué)特性非常相似和一致，有利于不同細(xì)胞群形態(tài)和功能的比較研究。
 

　　菌落(克隆)計(jì)數(shù)：在倒置顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)直徑大于75μm或含有50個(gè)以上細(xì)胞的克隆。
 

　　血細(xì)胞計(jì)數(shù)板細(xì)胞數(shù)/ml=4個(gè)大正方形細(xì)胞總數(shù)/4×104
 

　　細(xì)胞計(jì)數(shù)器/細(xì)胞分析儀(凱西，德國(guó))
 

　　細(xì)胞活力0.4%臺(tái)盼藍(lán)染色
 

　　MTT法可用于評(píng)價(jià)細(xì)胞的相對(duì)數(shù)量和活性
 

　　細(xì)胞的冷凍保存和復(fù)蘇：
 

　　低溫保存：4℃緩慢冷凍60分鐘(可延長(zhǎng))
 

　　-20℃下40-60分鐘(不能太長(zhǎng)，可以跳過(guò)*)
 

　　-80℃(半年內(nèi)轉(zhuǎn)液氮/過(guò)夜)程控冷卻儀表1-3℃/min轉(zhuǎn)液氮
 

　　復(fù)蘇：38℃溶解，注意水面不能接觸凍存管蓋邊
 

　　上清液以低速(500轉(zhuǎn)/分)離心除去，加入相同的培養(yǎng)基，輕輕吹掃上清液，接種于適當(dāng)大小的培養(yǎng)瓶中。